氧化型谷胱甘肽含量測定試劑盒說明書
For Research Use only
僅供研究用
貨號：QYS-231071
分光光度法 50管/48樣
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量測定意義：
GSH/GSSG 是細(xì)胞內(nèi)最重要的氧化還原對之一。因此，測定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)，也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的主要指標(biāo)之一。
氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量測定原理：
利用 2-VP 法測 氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 支，4℃保存。
試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 40 mL 試劑三溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑六：液體×1 瓶，-20℃保存。臨用前加入 0.5 mL 試劑三稀釋，4℃保存。
粗酶液提?。?/font>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清液（如上清不清澈，再離心 3min）待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；8000g 4℃離心 10min，取上清液（如上清不清澈，再離心 3min）的蒸餾水混勻待測。
3. 血清等液體：直接測定。
測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）水浴中保溫 30min。
3. 測定管：取 1 mL EP 管，加入 100 μ L 上清液，2 μ L 試劑二，蓋緊后混勻，置于 37℃水浴 30min；開蓋后依次加入 100 μ L 試劑四，700 μ L 試劑五，10 μ L 試劑六，迅速混勻后，測定 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和 A2，計算 A=A2-A1。
GSSG 含量計算公式:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y=0.0325x+0.046；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL），y 為吸光值( A)。
2、 按蛋白濃度計算
GSSG（nmol/mg prot）=( A-0.046)÷0.0325×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)=30.77×(A-0.046)÷Cpr
蛋白濃度需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒（貨號：QYS-237014）
3、按樣本鮮重計算
GSSG（nmol /g 鮮重）=( A-0.046)÷0.0325×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)=30.77×(A-0.046)÷W
4、按細(xì)胞數(shù)量計算
GSSG（nmol/104 cell）=( A-0.046)÷0.0325×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) =30.77×( A-0.046)÷細(xì)胞數(shù)量
5、按照液體體積計算
GSSG（nmol/mL）=( A-0.046)÷0.0325×V 樣÷V 樣=30.77×( A-0.046)
V 樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.1mL；V 樣總：加入提取液體積， 1mL；W：樣品質(zhì)量，g，Cpr：樣本蛋白濃度（mg/mL）
注意事項：
1. 提取過程中去掉蛋白質(zhì)，所以提取液不能用于測定蛋白含量。
2. 臨用前配制的試劑配好后 4℃保存，2 天內(nèi)使用完畢。
3. 反應(yīng)溫度.嚴(yán)格來說，為保證重復(fù)性，應(yīng)在 25℃下進(jìn)行反應(yīng)。
4. 反應(yīng)時間需精確控制，否則會影響反應(yīng)速率計算，產(chǎn)生較大誤差。樣品中的 GSSG 濃度盡可能低一些，否則反應(yīng)速率太大，沒法控制，所以稀釋倍數(shù)要盡量大些。
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