Caspase顯色底物套裝說明書
產(chǎn)品名稱：Caspase顯色底物套裝
英文名稱：Caspase Colorimetric Substrate Set
貨號：K132-7-25
品牌：原裝進(jìn)口
規(guī)格：25T
保存建議: 請在接收到Caspase顯色底物套裝產(chǎn)品后，置于-20℃保存.
試劑盒簡介: Caspase顯色底物套裝包括用于檢測caspase家族蛋白酶活性的熒光底物，包含即用型Caspase-1/-2/-3/-5/-6/-8/-9 pNA 顯色底物。
產(chǎn)品背景: Caspase屬于半胱氨酸蛋白酶，相當(dāng)于線蟲中的ced-3，這些蛋白酶是引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶，一旦被信號途徑激活，能將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)降解，使細(xì)胞不可逆的走向死亡.它們均有以下特點(diǎn)：①酶活性依賴于半胱氨酸殘基的親核性；②總是在天冬氨酸之后切斷底物，所以命名為caspase（cysteine aspartate-specific protease），稱之為凋亡酶；③都是由兩大、兩小亞基組成的異四聚體，大、小亞基由同一基因編碼，前體被切割后產(chǎn)生兩個活性亞基.
產(chǎn)品特點(diǎn): 所有Caspase比色底物都以即時可用的液體形式提供，使用方便，種類齊全.
ASSAY PROCEDURE:
1. Induce apoptosis in cells by desired method. Concurrently incubate a control culture without induction.
2. Count cells and pellet 1-5 x 106 cells.
3. Resuspend cells in 50 μl of chilled Cell Lysis Buffer (Cat.# 1067-100) and incubate cells on ice for 10 minutes.
4. Centrifuge for 1 min in a microcentrifuge (10,000 x g).
5. Transfer supernatant to a fresh tube and assay protein Concentration.
6. Dilute 50-200 μg protein to 50 μl Cell Lysis Buffer for each assay.
7. Add 50 μl of 2X Reaction Buffer (Cat.# 1068-20) containing 10 mM DTT (Cat.# 1201-1) to each sample.
8. Add 5 μl of the 4 mM pNA conjugated substrates (200 μM final conc.) into each tube individually and incubate at 37°C for 1-2 hour.
9. Read samples at 400- or 405-nm in a microtiter plate reader, or spectrophotometer using a 100-μl micro quartz cuvette (Sigma), or dilute sample to 1 ml with Dilution Buffer (Cat.# 1066-100, -500) and using regular cuvette (note: Dilution of the samples proportionally decreases the reading).Fold-increase in caspase activity can be determined by comparing these results with the level of the uninduced control.Note: Background reading from cell lysates and buffers should be subtracted from the readings of both induced and the uninduced samples before calculating fold increase in caspase activity.
如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
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